草鱼模拟肠液的开发及其在仿生消化仪上的应用

��ni�9� T�b�ם��~��X5S����-�^��u��ni�9� T�b� �ky"https://www.everhomeus.com/a/duizhao/" target="_blank" class="keylink">对照OD值）/（标准OD值-空白OD值）×标准品浓度/（10×0.64/0.04）×10。②肠组织中糜蛋白酶活力。每毫克肠组织蛋白在25 ℃、pH 7.05条件下每分钟分解蛋白生成1 μg氨基酸相当于1个酶活力单位。按照以下公式计算肠组织中糜蛋白酶活力：糜蛋白酶活力（U/mg prot）= （测定OD值-对照OD值）/（标准OD值-空白OD值）×标准品浓度/（10×0.64/0.04）/待测样本蛋白浓度。

1.3.4前肠、后肠黏液中Na+浓度的测定。

采用酸碱滴定法滴定肠液中Na2HPO4和NaH2PO4浓度来反映Na+浓度。用NaOH准确滴定H2PO4-，用酚酞作为指示剂，滴定终点由无色变为微蓝色。由于Na2HPO4的Ka3很小，不能直接连续滴定，用盐酸滴定HPO42-，用甲基橙作为指示剂，终点时溶液由红色变为黄色。

1.3.5草魚模拟肠液在仿生消化仪上的应用。

根据测定肠液中的酶活力、pH以及Na+浓度，以SDS-2仿生消化仪及相关技术为依托，配制基于该仿生消化仪的草鱼模拟肠液。按照该系统操作规程（略有改进），对配制的草鱼模拟肠液进行一系列仿生消化试验。

1.3.5.1草鱼幼鱼、成鱼饲料的仿生消化评估。分2批进行试验，试验均在仿生消化仪上进行。试验1分为2组，每组5个重复，第1组为A公司草鱼成鱼沉水料638（粗蛋白含量22%），第2组为A公司草鱼成鱼膨化料6636（粗蛋白含量26%）。试验2同样分为2组，每组5个重复，第1组为B公司草鱼幼鱼沉水料，第2组为B公司草鱼幼鱼膨化料。2批试验均利用配制的模拟肠液分别对草鱼幼鱼和成鱼饲料进行模拟消化。仿生消化仪的酶液反应温度设为25 ℃。

1.3.5.2外源酶制剂 （植酸酶）对饲料消化利用率的影响。

试验分为2组，每组5个重复，第1组为对照组，第2组为加酶组，在对照组的基础上添加300 g/t的植酸酶（2 000 U/g，粉剂）。利用仿生消化仪评估外源植酸酶对A公司草鱼成鱼颗粒料639（粗蛋白含量25%）中营养物质消化利用率的影响。

1.4数据处理试验数据采用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析（ANOVA），P<0.05表示差异显著；采用Duncan’s方法进行多重比较分析。试验结果均以平均值±标准误表示。

2结果与分析

2.1草鱼人工模拟肠液配方试验结果表明，草鱼前肠、后肠淀粉酶和糜蛋白酶活性均无显著差异，但前肠胰蛋白酶活性显著高于后肠胰蛋白酶活性（P<0.05）。

通过对草鱼肠液进行人工模拟，得到草鱼模拟肠液的配方：分别称取淀粉酶152.025 kU、胰蛋白酶45.959 kU以及糜蛋白酶12.893 kU，将三者溶解于250 mL去离子水中，缓慢搅拌直至完全溶解（勿在加热板上加热）。进行仿生试验时，透析袋中模拟肠液的总体积为20 mL，若需添加外源酶，按酶的推荐添加量折算成体积2 mL进行添加。

2.2草鱼人工模拟肠液的pH

使用pH计分别测定草鱼前肠黏液、后肠黏液的pH，结果表明前肠黏液pH为6.95，后肠黏液pH为6.92。前肠、后肠食糜的平均pH为7.05，为肠道消化酶反应时的pH环境，因此该试验中肠道消化酶测定时pH均为7.05。

2.3草鱼模拟肠液中的Na+浓度

2.3.1肠黏液中磷酸二氢钠的浓度。

通过滴定发现，磷酸二氢钠在前肠和后肠黏液中的浓度分别为0.187和0.199 mol/L。因此，在配制仿生消化试验磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液时，前肠、后肠分别称取无水磷酸二氢钠44.89和47.76 g，定容至2 000 mL容量瓶中，25 ℃条件下调节溶液pH至6.95。

2.3.2肠黏液中磷酸氢二钠的浓度。

通过滴定发现，磷酸氢二钠在前肠和后肠黏液中的浓度分别为0.357和0.352 mol/L。因此，在配制仿生消化试验磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液时，前肠、后肠分别称取无水磷酸氢二钠10148和100.06 g，定容至2 000 mL容量瓶中，25 ℃条件下调节溶液pH至6.92。

2.4草鱼模拟肠液在仿生消化仪上的应用

2.4.1草鱼模拟肠液对草鱼幼鱼、成鱼沉水料和膨化料的仿生消化试验。

模拟肠液对A公司的2种草鱼成鱼饲料和B公司的2种草鱼幼鱼饲料中干物质、粗蛋白消化率和代谢能值的影响分别见表1和表2。由表1、表2可知，A公司草鱼成鱼膨化料6636组干物质消化率、粗蛋白消化率以及代谢能值均显著高于沉水料638组（P<0.05）。A公司草鱼幼鱼膨化料组干物质、粗蛋白消化率及代谢能值也显著高于幼鱼沉水料组（P<0.05）。一般而言，在不同生物学方法条件下饲料代谢能的测定值与“真实值”的差值不低于10%的定量水平[6]。张子仪等[7]研究表明，在不同饲料组合条件下，同一饲料原料鸡代谢能值的绝对差值在10%以上。该研究结果表明干物质和粗蛋白的消化率与真实值的绝对差值均在10%左右，能够达到仿生消化的目的与要求，这说明该研究中草鱼模拟肠液配方能够较好地模拟草鱼肠道消化。

2.4.2外源酶制剂植酸酶对草鱼成鱼沉水料仿生消化的影响。

由表3可知，加酶组干物质、粗蛋白消化率及代谢能值均显著高于对照组（P<0.05），干物质消化率提高了约1%，粗蛋白消化率提高了3.5%，代謝能值提高了1.38 MJ/kg。这表明添加外源植酸酶可以显著提高草鱼成鱼饲料的营养物质利用率。

3结论

（1）笔者对配制的草鱼模拟肠液在仿生消化仪的应用进行了研究，结果表明饲料中干物质和粗蛋白的消化率与真实值的绝对差值均在10%左右，达到仿生消化的目的与要求，说明该草鱼模拟酶液能够用于仿生消化系统的体外模拟消化。

（2）仿生消化试验表明，外源添加植酸酶能够显著提高干物质、粗蛋白消化率以及代谢能值。

（3）通过对商品饲料的仿生消化試验表明，膨化料干物质和粗蛋白的消化率均在70%以上，代谢能值达到（13.97±0.30）MJ/kg，明显高于沉水料，但外源酶制剂是否在沉水料中应用更有效果尚有待深入研究。

参考文献

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[3] 赵峰.用酶法评定鸭饲料代谢能的方法学研究[D].北京：中国农业科学院，2006：35-47.

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[5] 张金梅.草鱼鱼种的食性[J].淡水渔业，1982（6）：41-42.

[6] 赵峰，张宏福，张子仪.基于模拟消化液和开发仿生消化系统评定家禽饲料代谢能值的研究进展[M]//张宏福.饲料营养研究进展，北京：中国农业科学技术出版社，2010：44-55.

[7] 张子仪，吴克谦，吴同礼，等.应用回归分析评定鸡饲料表观代谢能值的研究[J].畜牧兽医学报，1981，12（4）：223-229.

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